WING ZERO NETWORK
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Layton recibe una carta de la famosa cantante de ópera, Jenis Quatlane, invitándolos a ver su nueva función. Ella también le pide ayuda a Layton, Luke y Remi con un misterio, comentando que su amiga Melina murió hace un año, pero que regresó tiempo después convertida en una niña de siete años, afirmando haber encontrado el secreto de la vida eterna y conociendo todos los secretos que solo la verdadera Melina podría saber. Naturalmente, el caso fascina a Layton y a su aprendiz, por lo que se dirigen a la ópera Crown Petone, aunque Remi se queda en Londres investigando la desaparición de unas chicas en la ciudad.
La ópera trataba sobre un reino perdido: el Reino de los Inmortales. Antaño, existió una hermosa reina que amaba la música y era adorada por todos en el reino. Pero un día, la reina enfermó gravemente. El pueblo se esforzó por encontrar una cura, pero la medicina no pudo ayudarla. La reina finalmente falleció y, justo después, la cura fue completada: una poción de inmortalidad. El pueblo lamentó profundamente la muerte de su reina y, con el fin de reencontrarse con ella tras su reencarnación, decidieron volverse inmortales utilizando el elixir recién creado. El reino de Ambrosia sigue en algún lugar de este mundo, esperando el regreso de su reina para que ella pueda cantar por siempre.
Tras finalizar el espectáculo, aparece un hombre enmascarado que le propone algo al público: "Juguemos un juego", dice. "El ganador obtendrá la vida eterna. Los perdedores tendrán que morir". Depende de Layton y Luke entrar en el juego y descubrir el secreto de la vida eterna.
La historia se desarrolla entre los eventos de los videojuegos *Professor Layton and the Last Specter* y *Professor Layton and the Miracle Mask*.